Transformatie van E.coli met plasmiden

In dit experiment (Edvotek kit #222) worden twee verschillende plasmiden ingebracht in E. coli die respectievelijk groen en blauw fluorescerend eiwit produceren. De fenotypische verschillen van de kolonies zijn te zien in kleur en zijn het duidelijkst onder ver UV-licht. Transformanten worden geselecteerd op LB-agar met ampicilline. De kit is voldoende voor 10 groepen; het experiment duurt ongeveer 45 minuten plus incubatie gedurende de nacht. De benodigde apparatuur bestaat uit een incubator, 1-2 waterbaden, warmtebron, micropipetten (5-50 µl) met tips, pipetaspirator, etiketteerstift, hittebestendige handschoenen, ijsbad en UV-lichtbron. De transformatiecellen worden gevriesdroogd, waardoor ze ongeveer negen maanden houdbaar zijn. De nieuwste oefengids kan worden gedownload via de link bij de kassa. Voor spectrofotometrie kan de fluorescentie van het groene eiwit worden gemeten bij excitatie 473 nm en emissie 509 nm.

Voor gebruik in het onderwijs in Denemarken gelden speciale regels: experimenten met GGO's moeten worden uitgevoerd door een leraar van de bovenbouw van het voortgezet onderwijs met een gedocumenteerde cursus microbiologische methoden, genetische manipulatie en afvalbeheer, en het experiment moet uiterlijk twee weken voor de uitvoering worden gemeld bij de vakconsulent volgens de toepasselijke bijlagen en formulieren.

Toepassing van het product

In de biologie en biotechnologie biedt de oefening praktische ervaring met plasmidetransformatie, selectie en fenotypische screening, waardoor het begrip van genexpressie en antibioticaresistentiemarkers wordt versterkt. De resultaten kunnen gekoppeld worden aan concepten zoals promotorcontrole en eiwitfluorescentie. De workflow is vergelijkbaar met basisprocedures in microbiologische en biotechnologische laboratoria, waar transformatie wordt gebruikt voor klonen en eiwitproductie.

Let op: voor het educatieve gebruik van deze kit gelden specifieke wettelijke vereistenin Nederland.

Specificaties

Merk: Edvotek