Transformatie van E.coli met plasmiden

Edvotek kit nr. 222.

Dit experiment werkt met plasmide getransformeerde bacteriën. Met behulp van 2 verschillende plasmiden wordt een groen of blauw fluorescerend eiwit ingevoegd in E. coli-bacteriën. Het fenotypische verschil tussen de twee getransformeerde bacteriën kan direct worden waargenomen op de kleur van de kolonie, maar is het duidelijkst bij belichting met lang UV-licht. Zie de procedure in de afbeeldingenreeks.

Getransformeerde bacteriën met pFluoroGreen en pFLuoroBlue ingebracht kunnen worden gevonden wanneer ze worden gekweekt op LB-ampicilline bevattende agar en worden belicht met UV-licht.

 

Materialen voor 10 groepen

Proefduur 45 min + 5 min nachtincubatie

Benodigde apparatuur:

Incubator

1-2 waterbaden

Bunsenbrander/kookplaat/magnetron

Micropipetten (5-50 µl) incl. Tips

Pipetaspirator

Markeerpen

Warmtebestendige handschoenen

Ice voor ijsbad

Lange UV-lichtbron

Bevoorrading met alle benodigde monstermaterialen naast bovenstaande apparatuur. De transformatiecellen zijn gevriesdroogd, dus de kit is na ontvangst ongeveer 9 maanden houdbaar. Geleverd met alle benodigde testmaterialen, maar zonder de bovenstaande apparatuur.

Raadpleeg de meest recente oefengids op de website van Edvotek via de link die bij de kit is meegeleverd.

Als u wilt werken met spectrofotometrische bepaling, worden de volgende gegevens door Edvotek geleverd: Excitatiepiek: 473 nm Emissiepiek: 509 nm